大家好,小阳来为大家解答以上的问题。细菌培养基的制备,培养基的制备这个很多人还不知道,现在让我们一起来看看吧!
1、配制溶液向容器内加入所需水量的一部分,按照培养基的配方,称取各种原料,依次加入使其溶解,最后补足所需水分。
2、对蛋白胨、肉膏等物质,需加热溶解,加热过程所蒸发的水分,应在全部原料溶解后加水补足。
3、配制固体培养基时,先将上述已配好的液体培养基煮沸,再将称好的琼脂加入,继续加热至完全融化。
4、并不断搅拌,以免琼脂糊底烧焦。
5、2、调节pH值 用pH试纸(或pH电位计、氢离子浓度比色计)测试培养基的pH值,如不符合需要,可用10%HCl或10%NaOH进行调节,直到调节到配方要求的pH值为止。
6、3、过滤用滤纸、纱布或棉花趁热将已配好的培养基过滤。
7、用纱布过滤时,最好折叠成六层,用滤纸过滤时,可将滤纸折叠成瓦棱形,铺在漏斗上过滤。
8、4、分装已过滤的培养基应进行分装。
9、如果要制作斜面培养基,须将培养基分装于试管中。
10、如果要制作平板培养基或液体、半固体培养基,则须将培养基分装于锥形瓶内。
11、分装时,一手捏松弹簧夹,使培养基流出,另一只手握住几支试管或锥形瓶,依次接取培养基。
12、分装时,注意不要使培养基粘附管口或瓶口,以免浸湿棉塞引起杂菌污染。
13、装入试管的培养基量,视试管和锥形瓶的大小及需要而定。
14、一般制作斜面培养基时,每只15×150毫米的试管,约装3~4毫升(1/4~1/3试管高度),如制作深层培养基,每只20×220毫米的试管约装12~15毫升。
15、每只锥形瓶装入的培养基,一般以其容积的一半为宜。
16、5、加棉塞 分装完毕后,需要用棉塞堵住管口或瓶口。
17、堵棉塞的主要目的是过滤空气,避免污染。
18、棉塞应采用普通新鲜、干燥的棉花制作,不要用脱脂棉,以免因脱脂棉吸水使棉塞无法使用。
19、制作棉塞时,要根据棉塞大小将棉花铺展成适当厚度,揪取手掌心大小一块,铺在左手拇指与食指圈成的圆孔中,用右手食指插入棉花中部,同时左手食指与姆指稍稍紧握,就会形成1个长棒形的棉塞。
20、棉塞作成后,应迅速塞入管口或瓶口中,棉塞应紧贴内壁不留缝隙,以防空气中微生物沿皱折侵入。
21、棉塞不要过紧过松,塞好后,以手提棉塞、管、瓶不下落为合适。
22、棉塞的2/3应在管内或瓶内,上端露出少许棉花便于拔取。
23、塞好棉塞的试管和锥形瓶应盖上厚纸用绳捆札,准备灭菌。
24、6、制作斜面培养基和平板培养基培养基灭菌后,如制作斜面培养基和平板培养基,须趁培养基未凝固时进行。
25、(1)制作斜面培养基。
26、在实验台上放1支长0.5~1米左右的木条,厚度为1厘米左右。
27、将试管头部枕在木条上,使管内培养基自然倾斜,凝固后即成斜面培养基。
28、(2)制作平板培养基。
29、将刚刚灭过菌的盛有培养基的锥形瓶和培养皿放在实验台上,点燃酒精灯,右手托起锥形瓶瓶底,左手拔下棉塞,将瓶口在酒精灯上稍加灼烧,左手打开培养皿盖,右手迅速将培养基倒入培养皿中,每皿约倒入10毫升,以铺满皿底为度。
30、铺放培养基后放置15分钟左右,待培养基凝固后,再5个培养皿一叠,倒置过来,平放在恒温箱里,24小时后检查,如培养基未长杂菌,即可用来培养微生物。
31、参考资料来源:百度百科—培养基培养基的配制:配料:在容器中加入少量水,按照配方称取各种药品,加足所需水量(一药一勺,取药后立即盖上瓶盖)。
32、2、溶解:淀粉溶解:少量冷水调成糊状,加热溶解,特别是加有琼脂的培养基,一定要煮沸,琼脂的熔解温度95-97℃ ,且需要边加热边搅拌以防止烧焦。
33、3、调PH:用1N的盐酸或1N的 NaOH把培养基调节到所要求的值。
34、4、过滤:滤纸或棉花进行过滤。
35、5、分装:一般培养基放在三角瓶或试管中灭菌使用。
36、(1)三角瓶若作静置培养,则100ml培养基/250ml的三角瓶,最多不能超过150ml培养基/250ml的三角瓶,否则灭菌时培养基沸腾容易污染棉塞,造成染菌;若作摇瓶培养,则15-20ml培养基/250ml的三角瓶,保证通气良好。
37、(2)试管分装液体培养基一般装4-5ml,约试管的1/4高度。
38、固体斜面培养基一般装3-4ml,约试管的1/5高度。
39、6、包扎:分装好后,塞上棉塞,在用牛皮纸将棉塞包裹好,防止灭菌时水份进入把棉塞弄湿。
40、7、灭菌:按配方上要求的温度、压力进行高压蒸汽灭菌。
41、如果灭菌的温度太高,营养成分会被破坏,培养基中的糖、氨基酸会使培养基的颜色变深。
42、8、摆斜面:灭菌后需要摆斜面的试管要趁热斜着摆放,使其凝固成为一个斜面,约占试管长度的1/2。
43、9、贮存:培养基在30℃下放置一天,无污染的即可使用。
44、一般用牛皮纸包裹好存放于2-8℃冰箱中备用。
45、扩展资料:培养基,是指供给微生物、植物或动物生长繁殖的,由不同营养物质组合配制而成的营养基质。
46、一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐、维生素和水等几大类物质。
47、培养基既是提供细胞营养和促使细胞增殖的基础物质,也是细胞生长和繁殖的生存环境。
48、配置培养基注意问题: 根据不同微生物的营养需要配制不同的培养基。
49、2、 注意各种营养物质的浓度及合适配比,保持合适渗透压 。
50、3、 将培养基的 pH 控制在适宜的范围之内,以利于不同类型微生物的生长繁殖或代谢产物的积累。
51、4、要注意各种原料的配比,每种培养基的配比合适的配比,可以按照老师的要求去做。
52、5、如需要加热的时候注意时间的把握。
53、参考资料:百度百科—培养基配制溶液向容器内加入所需水量的一部分,按照培养基的配方,称取各种原料,依次加入使其溶解,最后补足所需水分。
54、对蛋白胨、肉膏等物质,需加热溶解,加热过程所蒸发的水分,应在全部原料溶解后加水补足。
55、配制固体培养基时,先将上述已配好的液体培养基煮沸,再将称好的琼脂加入,继续加热至完全融化。
56、并不断搅拌,以免琼脂糊底烧焦。
57、2、调节pH值 用pH试纸(或pH电位计、氢离子浓度比色计)测试培养基的pH值,如不符合需要,可用10%HCl或10%NaOH进行调节,直到调节到配方要求的pH值为止。
58、3、过滤用滤纸、纱布或棉花趁热将已配好的培养基过滤。
59、用纱布过滤时,最好折叠成六层,用滤纸过滤时,可将滤纸折叠成瓦棱形,铺在漏斗上过滤。
60、4、分装已过滤的培养基应进行分装。
61、如果要制作斜面培养基,须将培养基分装于试管中。
62、如果要制作平板培养基或液体、半固体培养基,则须将培养基分装于锥形瓶内。
63、分装时,一手捏松弹簧夹,使培养基流出,另一只手握住几支试管或锥形瓶,依次接取培养基。
64、分装时,注意不要使培养基粘附管口或瓶口,以免浸湿棉塞引起杂菌污染。
65、装入试管的培养基量,视试管和锥形瓶的大小及需要而定。
66、一般制作斜面培养基时,每只15×150毫米的试管,约装3~4毫升(1/4~1/3试管高度),如制作深层培养基,每只20×220毫米的试管约装12~15毫升。
67、每只锥形瓶装入的培养基,一般以其容积的一半为宜。
68、5、加棉塞 分装完毕后,需要用棉塞堵住管口或瓶口。
69、堵棉塞的主要目的是过滤空气,避免污染。
70、棉塞应采用普通新鲜、干燥的棉花制作,不要用脱脂棉,以免因脱脂棉吸水使棉塞无法使用。
71、制作棉塞时,要根据棉塞大小将棉花铺展成适当厚度,揪取手掌心大小一块,铺在左手拇指与食指圈成的圆孔中,用右手食指插入棉花中部,同时左手食指与姆指稍稍紧握,就会形成1个长棒形的棉塞。
72、棉塞作成后,应迅速塞入管口或瓶口中,棉塞应紧贴内壁不留缝隙,以防空气中微生物沿皱折侵入。
73、棉塞不要过紧过松,塞好后,以手提棉塞、管、瓶不下落为合适。
74、棉塞的2/3应在管内或瓶内,上端露出少许棉花便于拔取。
75、塞好棉塞的试管和锥形瓶应盖上厚纸用绳捆札,准备灭菌。
76、6、制作斜面培养基和平板培养基培养基灭菌后,如制作斜面培养基和平板培养基,须趁培养基未凝固时进行。
77、扩展资料培养基的配置原则:选择适宜的营养物质 总体而言,所有微生物生长繁殖均需要培养基含有碳源、氮源、无机盐、生长因子、水及能源,但由于微生物营养类型复杂,不同微生物对营养物质的需求是不一样的,因此首先要根据不同微生物的营养需求配制针对性强的培养基。
78、2、营养物质浓度及配比合适 培养基中营养物质浓度合适时微生物才能生长良好,营养物质浓度过低时不能满足微生物正常生长所需,浓度过高时则可能对微生物生长起抑制作用,例如高浓度糖类物质、无机盐、重金属离子等不仅不能维持和促进微生物的生长,反而起到抑菌或杀菌作用。
79、3、控制pH条件 培养基的pH必须控制在一定的范围内,以满足不同类型微生物的生长繁殖或产生代谢产物。
80、各类微生物生长繁殖或产生代谢产物的最适pH条件各不相同,一般来讲,细菌与放线菌适于在pH7-7.5范围内生长,酵母菌和霉菌通常在pH4.5-6范围内生长。
81、4、控制氧化还原电位(redox potential) 不同类型微生物生长对氧化还原电位(F)的要求不一样,一般好氧性微生物在F值为+0.1V以上时可正常生长,一般以+0.3一+0.4V为宜,厌氧性微生物只能在F值低于+0.1V条件下生长,兼性厌氧微生物在F值为+0.1V以上时进行好氧呼吸,在+0.1V以下时进行发酵。
82、5、原料来源的选择 在配制培养基时应尽量利用廉价且易于获得的原料作为培养基成分,特别是在发酵工业中,培养基用量很大,利用低成本的原料更体现出其经济价值。
83、6、灭菌处理 要获得微生物纯培养,必须避免杂菌污染,因此对所用器材及工作场所进行消毒与灭菌。
84、对培养基而言,更是要进行严格的灭菌。
85、对培养基一般采取高压蒸汽灭菌,一般培养基用1.05kg/cm2,121.3℃条件下维持15-30min可达到灭菌目的。
86、参考资料来源:百度百科—培养基(个人原创总结)虽然培养基的种类较多,但制备过程和步骤基本一致。
87、大致的配制程序如下:1.根据组成准确称取,混悬于装有蒸馏水烧瓶中,加热溶解;2.调整培养基的pH;3.过滤澄清;配制好的培养基,会产生沉淀或混浊,需要过滤澄清,有利于细菌生长的观察。
88、4.分装:制成的培养基根据实际使用的需要,进行分装。
89、在试管中可制成琼脂斜面、半固体培养基、琼脂高层、液体培养基等;基础培养基可装成大瓶储存备用。
90、有些培养基需要在灭菌后进行无菌分装,如琼脂平板等。
91、 5.灭菌:制成的培养基必须灭菌处理后才能使用。
92、根据培养基的成分、性质不同采用不同的灭菌方法,常用的灭菌方法有高压蒸气灭菌法、流通蒸气间歇灭菌法和血清凝固器灭菌法等。
93、6.质量检查 凡制成的培养基必须经过质量检查合格后方能使用。
94、至少要进行无菌试验和效能检测。
95、 7.保存 制备好的培养基,应注明名称、制备日期,存放于冷暗处或4℃冰箱中。
96、平板应倒置。
97、培养基的保存不宜过久。
98、不是啊用灵敏度为0.1mg的天平称取药品.(2)往烧杯加入适量蒸馏水或无菌水.(3)将药品放入烧杯内,并用玻璃棒搅拌使其溶解,难溶时可适当加温以加速溶解.(4)要待一种药品完全溶解后再加入下一种药品.(5)所加入的药品应依次加入,直至药品全部加入溶解为止。
99、例MS母液的配制按MS培养基成分表,将各种化学物质归成几大类,分别为大量元素、微量元素、铁盐、有机物。
100、大量元素10倍液(mg/L)微量元素1000倍液(mg/L)有机物100倍液(mg/L)铁盐NH4NO31,6500KNO31,9000CaCl2?2H2O4,400MgSO4?7H2O3,700KH2PO41,700HBO36,200MnSO4?4H2O22,300ZnSO4?7H2O8,600KI830Na2MoO4?2H2O250CuSO4?5H2O25CoCl2?6H2O25甘氨酸200肌醇10,000烟酸50维生素B650维生素B1405.57gFeS04?7H2O和7.45gNa2一EDTA溶于1升蒸馏水里,用时每配1升MS培养基取5ml。
101、取烧杯注入约600ml蒸馏水,按顺序加入药品并使其溶解,最后加蒸馏水定容至1000ml。
102、取烧杯注入约600ml蒸馏水,按顺序加入药品并使其溶解,最后加蒸馏水定容至1000ml。
103、2.培养基制备配制流程见图1-2,其顺序是:①取烧杯或三角瓶注入一定量的蒸馏水,将各种母液按所需容积分别用移液管吸取并混合在一起,然后按要求加入一定量的激素、蔗糖后定容至一定体积。
104、②用1mol/L的NaOH或HCl调节pH③如制固体培养基,则加入1%左右的琼脂后加热煮沸,使其熔化。
105、④分装,可用漏斗将液状培养基注入培养瓶,注入量视培养瓶容量大小而定,通常为容器的1/5左右。
106、⑤封瓶口。
107、⑥高压蒸汽灭菌。
108、120℃,1.5Mpa,消毒15~20min。
109、注意压力不能太大,时间也不宜过长,否则蔗糖、有机物特别是维生素类物质会在高温下分解,影响培养基的酸碱度,琼脂也会分解,颜色变深且不易凝固。
110、⑦灭菌后的培养基可放入接种室内静置,让其降温后凝固,如需斜面可将其斜放。
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